SUSTANCIAS OXÍGENO REACTIVAS (ROS) EN SEMEN CONGELADO-DESCONGELADO DE PORCINO

Resumo

La generación de ROS fue medida por citometría de flujo en muestras espermáticas descongeladas incubadas sin (niveles basales) o con (niveles inducidos) un inductor de ROS (1 mM de tert-butyl hidroperóxido) por 30 min a 39 °C y 5% de CO₂. Además, fueron simultáneamente teñidas con 2’, 7’-diacetato de diclorodihidrofluoresceína, acetil ester (1 mM, CM-H₂DCFDA), para estimar la producción de ROS e, ioduro de propidio (1.5 mM) para excluir la población espermática muerta. Los eyaculados de nueve verracos fueron congelados con 3% de glicerol y descongelados a ≈1200 ó ≈1800 ºC min^-1. La producción de ROS fue medida a los 0, 60, 120, 240 y 360 min en muestras mantenidas a 21-23 °C (no incubadas), o a 39 ºC y 5% de CO₂ (incubadas). La velocidad de descongelación no registró influencia (P>0.05) sobre la producción de ROS. La generación de ROS fue constante (P>0.05) en el tiempo en las muestras no incubadas, pero mostró un incremento progresivo en las muestras incubadas, siendo significativa (P<0.05) desde los 120 min en niveles basales ó 60 min de incubación en niveles inducidos. Además, una significativa variabilidad eyaculado/verraco fue evidente, tanto en niveles basales como inducidos en las muestras incubadas. La producción de ROS basal e inducida estuvo significativamente (P<0.01) correlacionada con la calidad espermática. La técnica utilizada es de gran utilidad para evaluar capacidad funcional en espermatozoides congelados-descongelados; sin embargo, se requieren estudios adicionales para estandarizar la misma y establecer umbrales indicativos de pérdida de calidad espermática.