Bayas-Morejon et al., 2021

Introducción

Mientras que los países en desarrollo continúan luchando con el tema de la inocuidad de los alimentos, es decir, la cantidad de alimentos suficiente para el consumo de la población en crecimiento; Existe otro dilema en estos países, se estima que más de 200 tipos de enfermedades producidas por patógenos son de transmisión alimentaria, causando problemas en grupos vulnerables, por lo que garantizar una alimentación saludable es un desafío para la salud pública (Paudyal et al., 2017). Entre estos patógenos se encuentra el género Salmonella spp. (Bayas-Morejón et al., 2019). Durante los últimos años, Salmonella spp. ha venido siendo uno de los agentes causales más

importantes de enfermedades transmitidas por alimentos en países desarrollados y en vías de desarrollo y es una de las principales causas de enteritis bacteriana aguda en personas en todo el mundo, además, se asocia comúnmente con ganado y aves de corral (Andoh et al., 2017). Para la identificación de las especies de Salmonella se han desarrollado métodos de identificación más rápidos y con mayor especificidad que los convencionales, entre los que se encuentran la PCR y la PCR Multiplex (Lindsey et al., 2017).

El presente estudio fue diseñado para conocer la ocurrencia de Salmonella spp. en tres tipos de carnes en la ciudad de Guaranda mediante la utilización de métodos bacteriológicos y moleculares.

Materiales y métodos

Colección de muestra

Un total de 61 muestras de tres tipos de carnes (19 de pollo, 20 de res y 22 de cerdo) se recolectaron del mercado local de Guaranda de la provincia Bolívar (Ecuador). Todas las muestras fueron transportadas y analizadas en un periodo no mayor a 4 horas partiendo desde el momento de la toma, Los análisis fueron realizados en el laboratorio de Microbiología de la Universidad Estatal de Bolívar.

Preparación de muestras y aislamiento bacteriano Para el aislamiento de Salmonella spp. se

inocularon asépticamente 25 g de muestras (carne) en una proporción 1:10 en agua con peptona tamponada (BPW) (Oxoid, Reino Unido). La dilución se incubó durante 24 horas a 37 °C. Transcurrido este tiempo, se siguieron las directrices ISO 579: 2003 / A1 (2007). Para el aislamiento, se inocularon placas de agar XLD (Oxoid Ltd, Inglaterra) y se incubaron a 37 °C durante 24 h, luego su selección en agar TBX (Oxoid Ltd, Inglaterra). Todas las cepas seleccionadas se analizaron mediante tinción de Gram, para ensayos posteriores,

las cepas se almacenaron a -20 ° C.

Análisis molecular

Cinco colonias de cada cepa cultivadas en agar TBX se suspendieron en 500 µL de tampón TAE 1X y se centrifugaron a 16.000 g durante 10 min a temperatura ambiente. La extracción de ADN se realizó utilizando el kit de purificación de ADN PureLink ™ Microbiome (Invitrogen, EE. UU.) Siguiendo las instrucciones del fabricante.

Ensayo de PCR y electroforesis

La PCR se realizó según el método establecido por Cheng et al. (2008). Para la electroforesis, 5μL de productos de amplificación fueron mezclados con 2 μL de tampón de carga Blue/Orange 6X, charge dye (Promega, EE. UU.) en geles de agarosa al 1.5% preparados con tampón TAE con 2 μL de SYBR Safe DNA (Invitrogen, EE. UU.), Luego el gel fue expuesto a 100 V durante 40 min. Finalmente, los tamaños de las bandas se visualizaron con un transiluminador UV. Como controles positivos se utilizó ADN de la cepa de referencia Salmonella arizonae (ATCC 13314).

Resultados y discusión

Aislamiento de bacterias mediante cultivo

En el aislamiento de Salmonella spp. por cultivo, 25/61 muestras tienen la presencia del patógeno, con un total de 35 aislamientos. La carne de cerdo mostró una mayor prevalencia del patógeno, seguida de la de res y pollo (Cuadro 1). Los resultados con valores de detección inferiores a los nuestros fueron obtenidos por Ahmed et al. (2014), 32 muestras (21.3%) resultaron positivas por cultivo para Salmonella spp. En otro estudio desarrollado por Shafini et al. (2017), un total de 86 (27.6%) muestras fueron positivas para Salmonella spp. Además, Ifeanyichukwu et al. (2016), obtuvieron un resultado mucho mayor que el nuestro, con una prevalencia de Salmonella spp. del 62% en productos avícolas. En Ecuador, existen pocos estudios relacionados con la detección y aislamiento de Salmonella spp. Así, tenemos el trabajo desarrollado por Vinueza-Burgos et al. (2016), donde analizaron 388 lotes de pollos de engorde seleccionados aleatoriamente de Quito, obteniendo una prevalencia por cultivo de 16.0%.

Identificación de los aislados de Salmonella spp. por

PCR

En la PCR para la detección de Salmonella spp, 32 aislamientos (12 aislamientos / 10 muestras de cerdo; 11 aislamientos/7 muestras de res y 9 aislamientos/6 muestras de pollo) fueron positivos para Salmonella

spp, (37.70%) (Cuadro 1); en los aislamientos positivos se obtuvo una banda característica de 262-pb (Figura 1). Trongjit et al. (2017) Obtuvieron resultados similares en Camboya, donde el 47% de las muestras de cerdo y pollo dieron positivo para Salmonella spp. por PCR. Por otro lado, Naik et al. (2015), obtuvo un valor de detección de Salmonella en la carne inferior al 10%.

Conclusión

Las diferencias en las tasas de prevalencia de Salmonella spp. en los diferentes tipos de carnes en este trabajo pueden atribuirse a múltiples factores, tales como variación geográfica y estacional, variaciones en los procedimientos de muestreo y prácticas de manejo animal; Además, nuestro trabajo es el único que ha enfocado su estudio en tres tipos de carne utilizando métodos moleculares y convencionales para

la detección en Ecuador.

Agradecimientos

Este estudio fue apoyado por el Proyecto: Proyecto no. 12-2017 del Departamento de Investigación y Vinculación, Universidad Estatal de Bolívar, Ecuador; Además, gracias también al proyecto de canje de deuda Ecuador-España por haber proporcionado los equipos

utilizados en este estudio.

Literatura citada

Ahmed O, Asghar A, El-Rahimand I, Hegazy A (2014). Detection of Salmonella in Food Samples by Culture and Polymerase Chain Reaction Methods. J Bacteriol Parasitol 5:1000187. doi:10.4172/2155- 9597.1000187.

Andoh L.A, Ahmed S, Olsen J.E. et al. (2017). Prevalence and characterization of Salmonella among humans in Ghana. Trop Med Health 45: 3. https://doi.org/10.1186/s41182-017-0043-z.

Bayas-Morejón F, Tigre A, Aldaz I, Parra P, Ramos E, Remache R and Zamora C (2019). Incidence of Salmonella spp. in Different Animal Species and Meat Products in Ecuador During the Period 2009-

2019. J Pure Appl Microbiol 13(2):725-732 doi: 10.22207/JPAM.13.2.08

Cheng CM, Lin W, Van KT, Phan L, Tran NN, Farmer D. (2008). Rapid detection of Salmonella in foods using real-time PCR. J Food Prot.,

71(12):2436‐2441.doi:10.4315/0362- 028x-71.12.2436

Ifeanyichukwu I, Chika E, Ogonna A, Chidinma I, Ajah M, Moses I, Stanley E, Nwakaeze E, Ngozi A, Agabus N (2016). Prevalence and antibiogram of Salmonella species isolated from poultry productsinEbonyi State, Nigeria. Ifeanyichukwuet al. / J Adv Vet Anim. Res 3(4): 353-359.